Kapat

Dijital PCR Nedir, Nasıl İşlev Görür? » Bilgiustam

Anasayfa
Bilim Dijital PCR Nedir, Nasıl İşlev Görür? » Bilgiustam
Bu içeriği değerlendir
[Toplam: 0 oy, Ortalama: 0 puan]

PCR’nin en mühim uygulaması ya DNA’yı artırmak, nicelendirmek veya aynı reaksiyonda her ikisini birden yapmaktır. Konvansiyonel PCR’de, ilgilenilen DNA, birden fazla kopyasını almak için amplifiye edildi şundan dolayı tek yahut çift DNA molekülü aşağı akış analizleri için kafi değildir. Aynı zamanda, geleneksel PCR kullanılarak gen ölçümü olası değildir, bundan dolayı gen ekspresyonu ve nükleik asit ölçümü, geleneksel PCR ile yapılamaz.
Nükleik asit, viral yük ve patojen miktarının belirlenmesi için reel zamanlı termocycler isminde olan gelişmiş bir PCR makinesine gerekseme vardır. Floresan kimyası kullanılarak bir numunede bulunan nükleik asit miktarı kantitatif PCR ile ölçülebilir. Floresan boya yahut hidroliz probu kullanılarak, göreceli miktar tayini, gen ekspresyonu, mikroRNA emek harcamaları ve patojen yük ölçümü için reel zamanlı PCR’de yapılabilir.
Reel zamanlı PCR artık sitokinlerin kantifikasyonu için altın standart bir yöntemdir ve hatta TB tespiti için en güvenli kantifikasyon makinesidir. Tekrar de, reel zamanlı PCR’nin muhtelif sınırlamaları sebebiyle, nükleik asidin kantifikasyonu için gelişmiş, sağlam ve daha doğru bir yönteme gerekseme vardır. Reel zamanlı PCR’yi kullanarak bilim insanları, bir numunede bulunan DNA yahut RNA miktarını tahmin edebilir. Aynı zamanda, tepki hazırlığı esnasında kullanılan büyük hacim sebebiyle, istenmeyen nükleik asitlerin miktarının belirlenmesine de yol açabilir. Buna ayrıca, fazlalık çok önemli olmasa da birkaç molekülün miktarı belirlenmez. Bu probleminin üstesinden gelmek için dijital PCR buluş edilmiştir. Dijital PCR ilkesi, bir numuneyi daha ufak mikro hacimlere bölerek mutlak nicelendirmesine dayanır. Numuneyi daha ufak bir hacme bölmenin genel fikri, o mikro hacimde bulunan tek bir molekülü ölçmektir, böylece ölçümün kesinliğini arttırır.
Dijital PCR Nelerdir?
Çoğu zaman dPCR yahut dePCR olarak malum dijital PCR, gDNA, cDNA yahut RNA’nın mutlak ölçümü için kullanılır. 1999 senesinde, Bert Vogelstein ve Kenneth Kinzler, kanser mutasyonlarının ender genotiplerini çözümleme ederek “dijital PCR” yi ortaya çıkarmıştır. Dijital PCR terimi 1992’de Sykes ve arkadaşları tarafınca çıkarılmıştır. Metot, ender alellerin tespiti ve nokta mutasyonlarının tespiti için çoğunlukla kullanılmaktadır. Ek olarak, NGS esnasında klonal amplifikasyonda kullanılır.
Nükleik asidin kantifikasyonu için mevcut altın standart metot, floresan kimyasına dayanan reel zamanlı PCR’dir. Hidroliz bazlı floresan prob yahut DNA interkalasyon boyası nükleik asit miktarının belirlenmesinde kullanılır. Özetle, floresan etiketli prob, diziye bağlandığı bir numunede tamamlayıcı ipliğini bulduğunda, hidrolize prob, makine tarafınca tespit edilen floresan yaymaktadır. Katmanlı boya bazlı yöntemde, floresan boya yalnızca dsDNA’ya bağlanır ve floresan yayar. Yayılan floresan miktarı makine tarafınca ölçülür. Sadece, “geleneksel qPCR” uygulaması standartlar gerektirmektedir. Standartlar, numuneyi ölçmek için temel olarak kullanılır, ek olarak numune kütlesinin aynı oranda olması icap eder.
Buna ayrıca, çoğullama kantifikasyon testini gerçekleştirmek ihtisas gerektirmektedir. Çoklama tahlillerinin gerçekleştirilmesi, rekabetçi tahlil doğası sebebiyle rahat bir iş değildir. Reel zamanlı PCR, ender alellerin yahut ayrışık örneklerin saptanmasında çoğu zaman uygulanamaz şundan dolayı iki misal arasındaki kantifikasyon sınırı 2 kattır. Bu sorunlar, bir numuneyi mikro hacimlere bölerek dijital formattaki toplam DNA molekül sayısını sayan dijital PCR isminde olan yeni nesil nükleik asit kantifikasyon yöntemi kullanılarak aşılır. Dijital PCR’nin iş akışı benzerdir, qPCR aynı reaktifleri ve benzer ısıl döngüleyici koşullarını kullanır….

Kaynak:https://www.bilgiustam.com/dijital-pcr-nedir-nasil-islev-gorur/

Bir cevap yazın

E-posta hesabınız yayımlanmayacak. Gerekli alanlar * ile işaretlenmişlerdir

Popüler Yazılar

DAHA FAZLA GÖSTER

VÜCUT KİTLE İNDEKSİ

ft
in
lbs
cm
kg